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在大型法蘭生產(chǎn)中，影響大型法蘭的性能因素有很多，下面我們說下常見的幾個(gè)因素，首先是退火溫度(退火溫度為引物和模板結(jié)合時(shí)候的溫度參數(shù)，當(dāng)50%的引物和互補(bǔ)序列表現(xiàn)為雙鏈DNA分子時(shí)的溫度·它是影響PCR特異性的較重要因素。在理想狀態(tài)下，退火溫度足夠低，以保證引物同目的序列有效退火， 同時(shí)還要足夠高，以減少非特異性結(jié)合。合理的退火溫度從55℃到70℃。退火溫度一般設(shè)定比引物的 Tm低5℃。
1.是否達(dá)到規(guī)定溫度。大型法蘭處理一般是采取固溶熱處理，也就是人們平常所謂的“退火”，溫度范圍為1040~1120℃(日本標(biāo)準(zhǔn))。你也可以通過退火爐觀察孔觀察，退火區(qū)的大型法蘭管件應(yīng)為白熾狀態(tài)，但沒出現(xiàn)軟化下垂。
2.其次是爐體密封性，光亮退火爐應(yīng)是封閉的，與外界空氣隔絕;采用氫氣作保護(hù)氣的，只有一個(gè)排氣口是通的(用來點(diǎn)燃排出的氫氣)。檢查的方法可以用肥皂水抹在退火爐各個(gè)接頭縫隙處，看是否跑氣;其中 容易跑氣的地方是退火爐進(jìn)管子的地方和出管子的地方，這個(gè)地方的密封圈特別容易磨損，要經(jīng)常檢查經(jīng)常換。
3 后是保護(hù)氣壓力，為了防止出現(xiàn)微漏，爐內(nèi)保護(hù)氣應(yīng)保持一定的正壓，如果是氫氣保護(hù)氣，一般要求20kBar以上。退火氣氛：一般都是采用純氫作為退火氣氛，氣氛純度 好是99.99%以上，如果氣氛中另一部分是惰性氣體的話，純度也可以低一點(diǎn)，但是 不能含有過多氧氣、水汽。
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